Количественная и качественная характеристика стареющих мононуклеарных клеток крови у пациентов с атопическим дерматитом

Введение. Под клеточным старением понимают необратимую утрату клетками способности пролиферировать, вызванную стрессовыми воздействиям. Накопление стареющих клеток описано при различных воспалительных заболеваниях и может быть как следствием воспаления, так и способствовать его поддержанию, что обусловлено повышенной продукцией провоспалительных цитокинов стареющими клетками. Цель исследования - провести количественную и качественную оценку стареющих субпопуляций мононуклеарных клеток (МНК) крови у пациентов с хроническим воспалительным заболеванием кожи - атопическим дерматитом. Материал и методы. МНК крови выделяли из гепаринизированной венозной крови пациентов и здоровых доноров в градиенте плотности фиколла. Для выявления стареющих клеток МНК окрашивали конъюгатами антител к поверхностным маркерам (CD3, CD56, CD14, CD19) и к внутриклеточным белкам - маркерам клеточного старения (p21^WAF1/CIP1, p16^INK4A), после чего анализировали методом проточной цитометрии. Активность ß-галактозидазы, ассоциированной со старением, оценивали с помощью проточной цитометрии после инкубации клеток со специфическим флуорогенным субстратом. Уровень ИЛ-6 в плазме крови оценивали методом иммуноферментного анализа. Результаты. Стареющие клетки с фенотипом p21+p16+ были обнаружены во всех исследованных субпопуляциях МНК периферической крови как у здоровых доноров, так и у пациентов. В субпопуляции CD3+CD56+-Т-клеток у пациентов число стареющих клеток было достоверно повышено по сравнению с одноименной субпопуляцией у здоровых доноров. Активность ß-галактозидазы, ассоциированной со старением, в субпопуляциях моноцитов, Т- и НК-клеток у пациентов коррелировала со степенью тяжести заболевания. В группе пациентов с атопическим дерматитом была выявлена умеренная положительная корреляция уровней ИЛ-6 в плазме с возрастом, которая отсутствовала в группе здоровых доноров. Заключение. Впервые проведена количественная оценка стареющих клеток среди МНК крови у пациентов с атопическим дерматитом. Выявлено повышенное содержание стареющих клеток в субпопуляции CD3+CD56+-Т-клеток у пациентов по сравнению со здоровыми донорами.

Introduction. Cellular aging is described as the irreversible loss of the ability of cells to proliferate, caused by stressful effects. The accumulation of aging cells has been described in various inflammatory diseases and can be both a consequence of inflammation and contribute to its maintenance, which is due to increased production of proinflammatory cytokines by aging cells. Aim - to conduct a quantitative and qualitative assessment of senescent subpopulations of blood mononuclear cells (MNCs) in patients with a chronic inflammatory skin disease - atopic dermatitis. Material and methods. Blood MNCs were isolated from heparinized venous blood of patients and healthy donors in a Ficoll density gradient. To identify senescent cells, MNCs were stained with conjugates of antibodies to surface markers (CD3, CD56, CD14, CD19) and to intracellular proteins - markers of cellular senescence (p21^WAF1/CIP1, p16^INK4A), after which they were analyzed by flow cytometry. Senescence-associated beta-galactosidase activity was measured by flow cytometry after incubation of cells with a specific fluorogenic substrate. Plasma IL-6 levels were measured using ELISA. Results. Senescent cells with p21⁺p16⁺ phenotype were detected in all studied subpopulations of peripheral blood MNCs in both healthy donors and patients. Significantly higher number of senescent cells was found in CD3+CD56+-T-cell subpopulation in patients compared to healthy donors. Senescence-associated beta-galactosidase activity in monocyte, T cell, and NK cell subsets in patients correlated with disease severity. Moderate positive correlation of plasma IL-6 levels with age was found in the atopic dermatitis group, which was absent in the healthy donor group. Conclusion. For the first time was performed quantitative evaluation of senescent cells among blood MNCs in patients with atopic dermatitis. Increased content of senescent cells for patients compared to healthy donors was revealed in CD3+CD56+-T-cell subpopulation.