Оценка встречаемости условно-патогенных бактерии в пасленовых растениях в защищенном грунте методом секвенирования нового поколения (NGS)

Актуальность. В последние годы отмечается резкий рост числа случаев заболеваний человека и животных, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами. Сельскохозяйственные растения служат одним из естественных резервуаров таких патогенов. Механизмы поражения растений схожи с механизмами патогенности бактерий человека и животных. По мере изучения экологии патогенных бактерий, были получены данные, однозначно показывающие возможность их длительного выживания и размножения, без признаков потери признаков вирулентности к организму основного хозяина. Методология. Образцы растений томата и картофеля (39 шт.) были получены из 12 тепличных комбинатов и селекционных теплиц Московской области. Геномную ДНК и РНК выделяли с использованием соответствующих наборов. Для амплификации гипервариабельного V3-V4 участка гена 16S рибосомальной РНК использовались стандартные праймеры. Секвенирование проводили на платформе Illumina. Полученные данные секвенирования обрабатывались программой, написанной с использованием алгоритма QIIME 1.9.1. Был использован алгоритм классификации операционных таксономических единиц (ОТЕ) с открытым референсом (Open-reference OTU), порог отсечения при классификации 97%. Результаты. В данной работе мы рассматриваем экспериментальные подтверждения латентного выживания условно-патогенных бактерий, используя как анализ метагенома бактериального сообщества на растениях в защищенном грунте и анализ популяции бактериофагов, что применяется в качестве индикатора присутствия целевых видов в окружающей среде.

Relevance. In recent years, there has been an alarming increase in the number of human and animal disease cases caused by opportunistic microorganisms. These pathogens are often found in agricultural plants, which serve as natural reservoirs for them. The mechanisms of plant damage caused by these pathogens are similar to those of human and animal pathogenic bacteria.As the ecology of these pathogenic bacteria has been studied, data has been obtained that clearly shows the possibility of their long-term survival and reproduction in plants, without any signs of loss of their virulence towards the main host organism. Methodology. Tomato and potato plant samples (39 in total) were collected from 12 different greenhouses in the Moscow region. Genomic DNA and RNA were isolated using appropriate kits. Standard primers were used to amplify the hypervariable V3-V4 region of the 16S ribosomal RNA gene. Sequencing was performed on the Illumina platform. The obtained sequencing data was processed by a program written using the QIIME 1.9.1 algorithm. An open-reference Opec classification algorithm (OTU) was used, with a classification threshold of 97%. Results. In this paper, we consider experimental evidence for the latent survival of opportunistic bacteria using both metagenome analysis of the bacterial community on protected plants and bacteriophage population analysis, which is used as an indicator of the presence of target species in the environment.